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生物制藥殘余DNA抽提試劑盒 (NaI法DNA提取試劑盒)簡介

更新時間:2021-02-05      點擊次數:4481

   

生物制藥殘留DNA提取試劑盒( biohub B48202 )

生物制藥殘留DNA提取試劑盒(NaI法)
殘留DNA提取試劑盒遵照中國藥典記載的NaI法,適用于疫苗和治療用生物制品所含宿主細胞殘余DNA的提取。
殘留DNA提取試劑盒可以提取樣品中含有的極微量的DNA,回收率較高。DNA的提取操作時間為60-90 分鐘。提取的DNA可以通過qPCR進行定量。
 
 生物制藥殘余DNA抽提試劑盒 (NaI法DNA提取試劑盒)
 
特點
 
 
● 遵照中國藥典登載的NaI*1
● 高回收率
● 單管操作(無需換管) ,耗時僅60-90 min
● 不需要Phenol和Chloroform等有機溶劑
● 兼容多種DNA
*1 為使DNA檢測方法與標準保持同步,中國藥典(The Chinese Pharmacopoeia)宣布建立殘留細胞DNA檢測國家標準。NaI法將作為殘留DNA提取方法,被新增至2020版的中國藥典中。
◆ 原理
1. 使樣品中的蛋白質和脂質溶于NaI
2. Isoproanol與糖原選擇性地共沉淀DNA。
◆ 使用方法
 

q 1、每個樣品添加500uL或稀釋至2 mL微離心管

q 2、加20uL洗滌劑組合液到每管,并輕輕的渦旋

q 3、選項:如果高濃度的蛋白質干擾DNA提取和DNA分析,每個樣品中吸取添加20uL消化蛋白酶K(10mg/ml),在60°C, 20min,然后在95°C滅酶 5min

q 4、加500uL NaI溶液到每個微管中,并輕輕的渦旋

q  5、50°C孵育10分鐘

q 6、加900uL異丙醇渦旋

q 7、室溫孵化30min

8、離心機12000轉15min

9、輕輕倒出或吸出上清液

q 10、添加1.8ml洗滌緩沖液(含酒精),渦旋

11、離心機12000轉10min

q  12、輕輕倒出或吸出上清液

q 13、風干DNA

q 14、添加20-60uL水輕輕渦旋溶解DNA

q 15、純化的DNA可進行PCR、實時定量PCR、酶切、DNA測序、熒光染色法

注意事項:
1) 用于稀釋NaI溶液的蒸餾去離子水須去除DNA。
2) 配制好的洗滌溶液(B)在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗滌溶液(B),加入糖原 溶液到無菌離心管中至合適體積即可。
3) 在保存期間NaI溶液會結晶,加熱溶液至50℃可幫助溶解。
4) 提取步驟應在DNA 變性之前,因此重要的是使用無菌技術盡可能降低DNA 污染。預先包裝好的無菌吸管、無菌試管和手套都要經過此步驟。
 
5)   請于各步驟使用攪拌器將溶液攪拌均勻。樣品溶液里含有DNA酶時,進行步驟2之前請先進行步驟3。步驟4里樣品溶解不*時,請把保溫溫度升至40-60℃幫助溶解。但是含有部分蛋白(γ-球蛋白)或高濃度蛋白的樣品(>50mg/ml),加熱可能會導致蛋白聚集,請注意。
 
 
◆ 應用案例
DNA spiking test(加標回收實驗)
DNA Extractor  Kit( biohub B48202 )可以高產量提取殘留DNA,甚至少量殘留DNA。
 
◆ 試劑盒構成
內容物
內容量
NaI法溶液
25ml
洗滌劑組合液
1ml
洗滌緩沖液(無酒精)
30 mL
糖原溶液
100uL
備注:每種成分不單獨出售

試劑盒不包含:

乙醇(洗滌緩沖液)

異丙醇(用于DNA沉淀)

2ml微復合管(離心或等效的)

微型離心機(離心或等效的)

 

 
biohub B48202產品信息
 
產品編號
產品名稱
儲存
包裝
 B48202
DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method(Sodium Iodide Method)
殘留DNA提取試劑盒(NaI法)
2-10℃
50 tests
 
■ 保存
2 - 10℃,試劑盒的保存期為2 - 3 年。
 
 
在工業生產的疫苗和治療用生物制品(干擾素、白細胞介素、單克隆抗體、重組蛋白)中,宿主細胞殘余DNA污染直接影響終產品和整個生產過程的質量和產量,可能引起動物致瘤、感染病毒DNA等嚴重后果,中國藥典、WHO、EU、FDA對宿主細胞DNA殘留*都有規定。傳統的DNA提取方法蛋白酶K-SDS法在SDS的穩定和促進下降解細胞中的蛋白質特別是核酶,再經有機溶劑萃取得到高質量的DNA,但毒DNA和生物制品宿主細胞殘余DNA的提取試劑盒。使用新型提取步驟,用(NaI)作為促溶劑,穩定且靈敏度高、時間短,無有毒溶劑,無需復雜和費力操作,即可從樣品中得到高質量和高回收率的DNA。
 
 
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